Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания
Глава 10. ПРЕПАРАТЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА
Возбудители бруцеллеза - B. melitensis, B. abortus, B. suis - относятся к роду Brucella и входят в группу 4 (Грамотрицательные, аэробные/микроаэрофильные палочки и кокки) классификатора бактерий Берджи.
Бруцеллы - мелкие, неподвижные палочки, располагающиеся в мазках отдельными группами. Спор не образуют, некоторые штаммы образуют капсулу. Грамотрицательны. Облигатные аэробы.
Высоко требовательны к питательным средам. Элективной средой для их культивирования являются печеночный агар, печеночный бульон. Культивируются в аэробных условиях, но при повышенном содержании углекислого газа.
Биохимически бруцеллы малоактивны.
Дифференциация бруцелл на виды и на биовары основана на комплексе биологических признаков: потребность в СО2, способность расти на средах в присутствии некотрых красителей (основной фуксин, тионин), образование Н2S.
Антигенное строение бруцелл сложное; у них имеются общие родоспецифические и видоспецифические антигены.
К основным факторам патогенности бруцелл относится продукция эндотоксина, ферментов агрессии и защиты (гиалуронидаза, факторподавляющий фагоцитоз и др.). Антигены бруцелл обладают выраженным сенсибилизирующим (аллергенным) действием. Развитие инфекционной аллергии определяет своеобразие патогенеза, клиники бруцеллеза и иммунитета.
Бруцеллез - особо опасная инфекция. Источником инфекции являются больные животные. Люди, болеющие бруцеллезом, как источник инфекции не представляют угрозы окружающим.
Основные пути заражения - алиментарный и контактно-бытовой.
Бруцеллы проникают в организм через неповрежденные кожу и слизистые оболочки. С места внедрения они попадают в лимфатические узлы, вызывая их пролиферацию и воспаление. Бруцеллы легко прорывают лимфатический барьер, проникают в кровь и разносятся по всему организму, образуя очаги размножения в костном мозге, печени, почках и других органах. Микробы и продукты их жизнедеятельности вызывают сенсибилизацию организма, что приводит к формированию инфекционной аллергии.
В течение болезни формируется нестерильный инфекционный иммунитет. Постинфекционный иммунитет перекрестный и недостаточно напряженный.
Разнообразие клинических проявлений бруцеллеза существенно повышает значимость лабораторной диагностики этого заболевания.
Материалом для исследования является кровь. Основной метод диагностики - серологическое исследование (реакции Райта или Хейдельсона), а также постановка аллергической диагностической пробы с бруцеллином (реакция Бюрне). Разработаны тест-системы для реализации методов иммуноиндикации и молекулярно-генетических методов. Бактериологическое исследование проводится только в лабораториях, работающих с особо опасными инфекциями.
Для этиотропной терапии применяют антибиотики. При лечении хронических форм бруцеллеза используют лечебную бруцеллезную вакцину.
Специфическая профилактика осуществляется живой вакциной.
Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вакцина
Данный препарат представляет собой взвесь живой культуры вакцинного штамма B. abortus 19-ВА в сахарозо-желатиновой среде, высушенную методом сублимационной сушки. Сухая вакцина имеет вид аморфной или кристаллической массы молочно-белого или слегка желтоватого цвета. Вакцину высушивают в вакуумных ампулах емкостью 6-8 мл. В каждой ампуле содержится от 5 до 30 доз вакцины. Одна накожная прививочная вакцинирующая доза равна 10 млрд., а ревакцинирующая - 5 млрд. живых бруцелл. В ампулах с сухой вакциной должен сохраняться вакуум в пределах 200 мм рт. ст., остаточная влажность - в пределах 1,5-3 %. Вакцину проверяют на отсутствие бактериальной загрязненности, безвредность и иммуногенность.
Безвредность устанавливают на пяти белых мышах весом до 20 г, которым подкожно вводят 2 млрд. микробных тел. Мыши в течение 6 дней должны быть живы.
Иммуногенные свойства определяют на десяти морских свинках весом 350-400 г. Свинки получают однократно по 10 доз сухой вакцины; через 20-30 дней свинок заражают вирулентным штаммом
B. melitensis. Через 20-30 дней животных забивают, вскрывают и исследуют бактериологическим методом. Вакцину признают иммуногенной, если не менее 7 из 10 свинок, привитых вакциной, не поддаются заражению культурой вакцин овечьего типа.
Бруцеллезную живую сухую вакцину применяют для вакцинации и ревакцинации людей против бруцеллеза. Иммунизации против бруцеллеза подлежат лица профессионально связанные или временно привлекаемые к работе с мелким рогатым скотом. Показанием к вакцинации людей является наличие бруцеллезной инфекции у мелкого рогатого скота или выделение бруцелл козье-овечьего вида от других животных. В очагах бруцеллеза крупного рогатого скота при инфекции B. abortus проводить прививки не рекомендуется.
Вакцинацию проводят накожно однократно. Такую вакцину запрещается использовать для подкожного введения.
Непосредственно перед прививкой вакцину разводят стерильным физиологическим раствором. Необходимо обеспечить наличие определенного числа бруцелл в одной прививочной дозе. Для этого в ампулу с вакциной вносят двойное количество растворителя. Содержимое тщательно перемешивают.
Прививку производят на наружной поверхности средней трети плеча. Кожу предварительно очищают спиртом. После высыхания на кожу наносят по одной капле вакцины в двух местах на расстоянии 3-4 см. Затем стерильным прививательным пером через каждую каплю вакцины производят по три крестообразные насечки длиной 0,8-1 см на расстоянии 0,3-0,4 см друг от друга. Насечки не должны кровоточить. Плоской стороной пера втирают вакцину в насечки, после чего вакцина должна высохнуть в течение 5-10 мин.
Через 24-48 часов развивается местная реакция, проявляющаяся в появлении розово-красных узелков по ходу насечек, иногда сливающихся в валик., образующий небольшую припухлость.
Взрослых вакцинируют одной дозой, что соответствует 2 каплям вакцины. Для вакцинации детей от 7 до 15 лет используют половину дозы взрослого, а ревакцинацию производят половинной дозой, установленной для вакцинации. По эпизоотологическим и эпидемиологическим показателям накожная ревакцинация производится через 7-12 месяцев.
Иммунитет против бруцеллеза формируется к концу 1-го месяца, сохраняя наивысшую напряженность в течение последующих 5-6 мес.
Вакцина должна храниться в темном, прохладном помещении при температуре не выше 10 °С. Возможно хранение при температуре ниже 0 °С при отсутствии резких колебаний температуры. Хранение и транспортировка вакцины при температуре выше 10 °С недопустима, так как при этом снижается иммунологическая эффективность препарата.
Срок годности вакцины - 12 месяцев со дня изготовления. Переконтролю вакцина не подлежит. Забракованную или неиспользованную по истечении срока годности вакцину уничтожают кипячением или дезинфицирующими средствами. На уничтоженную вакцину составляют акт с указанием причин, по которым она не была использована.
Поливалентная бруцеллезная лечебная вакцина
Для лечения острых и хронических форм бруцеллеза применяется поливалентная бруцеллезная вакцина. Этот препарат приготавливается из хорошо проверенных штаммов B. melitensis и B. abortus bovis, обладающих типичными культуральными, биохимическими, агглютинабельными свойствами, вирулентных для белых мышей и морских свинок.
Вакцина представляет собой взвесь в физиологическом растворе бруцелл овечьего и коровьего видов, убитых нагреванием при 60 °С в течение 1 часа, и содержит 500 млн. и 1 млрд. микробных тел в 1 мл. Контролируется вакцина на стерильность, чистоту и стандарт, а маточная взвесь - на токсичность и специфическую безвредность. Препарат разливается в ампулы по 2 мл.
Перед употреблением вакцину встряхивают до получения равномерной мути; при наличии хлопьев или крупинок вакцина бракуется. Вакцина из вскрытых ампул немедленно используется, нельзя разводить вакцину впрок.
Для получения соответствующей лечебной дозы вакцину разводят стерильным физиологическим раствором. Вакцинотерапия производится при положительной аллергической реакции. При отрицательной или сомнительной внутрикожной пробе, даже при наличии положительной реакции агглютинации, от применения этого метода лечения следует временно воздержаться до появления выраженной аллергической реакции.
Вакцина применяется в виде внутривенных и внутрикожных инъекций в соответствующей дозировке. По ориентировочной схеме внутрикожные инъекции осуществляются следующим образом: вводится в две точки 2-4-10 млн. микробных тел вакцины, разведенной 1:100, затем в четыре точки - 20 млн., в десять точек - 100 млн., в десять-двенадцать точек - 200 млн. вакцины, разведенной 1:10 и, наконец, в шесть точек - 300 млн. неразведенной вакцины.
Основным методом вакцинотерапии бруцеллеза является внутривенный. Он производится только в условиях стационара, начиная с введения одного-двух миллионов микробных тел, а при гиперреактивности - с двухсот тысяч. При определении количества инъекций и интервалов между ними необходимо подходить строго индивидуально.
Введение вакцины бруцеллезному больному сопровождается резкой шоковой реакцией, эта реакция не является опасной для больных, но у некоторых из них она может оказаться тяжелой и повлечь за собой ослабление сопротивляемости организма. Степень реакции зависит от аллергического состояния больного, показателем которого является (кроме клинических симптомов) внутрикожная аллергическая проба.
Срок годности вакцины - 1,5 года.
Бруцеллезный единый диагностикум
Диагностикум - антиген предназначен для постановки реакции агглютинации Райта, являющейся одной из основных иммунологических реакций, применяемых в диагностике бруцеллеза, а также реакции агглютинации на стекле.
Препарат представляет собой взвесь бруцелл в физиологическом растворе, содержащем в 1 мл 10 млрд. микробных тел, убитых 0,5 % формалином или нагреванием с последующим добавлением в качестве консерванта карболовой кислоты.
Штаммы для изготовления диагностикума должны обладать всеми характеризующими бруцеллы свойствами. Выращивание бруцелл производят на обычном мясопептонном агаре с добавлением 1 % глюкозы и 2 % глицерина или на печеночном агаре при температуре 37 °С в течение 48-72 часов. После этого производят смыв бруцелл 0,5 % формалинизированным физиологическим раствором, устанавливают стандарт в 10 млрд. микробных тел в 1 мл.
Формалинизированную взвесь - диагностикум ставят в термостат при 37 °С на 48 часов для инактивирования. Препарат разливают в ампулы, контролируют на стерильность, стандарт и агглютинабельность.
Препарат представляет собой белую, слегка желтоватую гомогенную взвесь. Для постановки реакции Райта диагностикум разводят в десять раз (до конечной концентрации в 1 млрд. микробных тел), для реакции агглютинации на стекле - используют цельный (0,03 мл).
Срок годности диагностикума - 1 год.
Диагностикум для серологической
реакции Хеддльсона - Кайтмазовой
Диагностикум - антиген представляет собой прокипяченную взвесь бруцелл в 12 % растворе поваренной соли с добавлением красителей (генцианвиолет или метиленовый синий) и содержит 10 млрд. микробных клеток в 1 мл.
Изготовление препарата (кроме метода инактивации) и контроль производится так же, как и диагностикума для реакции Райта.
Срок годности препарата - 1 год.
Бруцеллин для внутрикожной пробы по Бюрне
Препарат представляет собой фильтрат 3-недельной убитой нагреванием бульонной культуры бруцелл из штаммов овечьего, коровьего и свиного видов. Это прозрачная жидкость светло-желтого цвета. Каждая ампула содержит 1 мл бруцеллина. Основным действующим началом бруцеллина является специфический белок (аллерген).
Бруцеллин применяют для постановки внутрикожной реакции Бюрне. Аллергическая внутрикожная проба основана на способности организма, сенсибилизированного бруцеллезным антигеном, специфически отвечать местной реакцией на внутрикожное введение небольших доз бруцеллина. Реакция специфична, отличается высокой чувствительностью и позволяет часто ставить диагноз бруцеллеза в случаях, когда гемокультура или серологические реакции остаются отрицательными. Она появляется у больных, как правило, к концу 1-го месяца заболевания. В дальнейшем реакция Бюрне сохраняется с большим постоянством очень долго, иногда годами, уже после исчезновения клинических симптомов.
Реакция Бюрне может быть положительной и у клинически здоровых людей. В этих случаях она свидетельствует об аллергической перестройке организма под влиянием бессимптомной инфекции, что часто наблюдается у лиц, которые по своей профессии имеют дело с больным бруцеллезом крупным рогатым скотом.
Внутрикожная проба становится положительной и после вакцинации людей живой бруцеллезной вакциной.
При положительной реакции на месте введения бруцеллина появляется болезненная отечность красноватого или бледно-розового цвета в зависимости от пигментации и особенностей кожи.
Реакцию оценивают обычно на следующий день после ее постановки путем осмотра и ощупывания кожи. Наличие выраженного отека кожи на месте введения бруцеллина считают положительной аллергической реакцией. При регистрации положительной реакции отмечают максимальный размер отека в см, степень болезненности и окраску. Диагностическое значение имеет отек не менее 2×3 см. В случае отрицательного результата через 24 ч учет реакции производят повторно через 48 ч.
Бруцеллин следует хранить при температуре от 4 до 10 °С в сухом помещении. При температуре ниже 0 °С транспортировка препарата недопустима.
Срок годности препарата - 1 год. По истечении срока годности препарат подлежит переконтролю для продления срока годности. При сохранении физических свойств и активности срок годности может быть продлен на 6 мес.
Антиген для опсоно-фагоцитарной реакции
Препарат предназначен для проверки реактивности организма больного бруцеллезом по опсоно-фагоцитарной реакции. Антиген готовится из одного или нескольких штаммов бруцелл любого типа.
Для этой цели подбираются такие штаммы, которые не поглощаются нейтрофилами здоровых людей; наоборот, нейтрофилы больных бруцеллезом должны их фагоцитировать.
Препарат представляет собой взвесь инактивированных теплом бруцелл в стерильном растворе поваренной соли. Препарат содержит 8 млрд. микробных тел в 1 мл. Бактериальную взвесь проверяют на чистоту и стерильность по обычной методике. Затем суспензию разливают в ампулы, запаивают и этикетируют.
Готовый препарат также подвергается контролю на чистоту и стерильность.
Срок годности диагностикума - 2 года со дня изготовления.
Бруцеллезная агглютинирующая сыворотка
Для идентификации культур бруцелл по специфической реакции агглютинации и для стандартизации бруцеллезных диагностикумов применяется гипериммунная сыворотка крови крупного рогатого скота, иммунизированного убитой культурой бруцелл из типичных штаммов. Сыворотка выпускается в высушенном состоянии с титром не ниже 1:1600.
Срок годности сыворотки - 5 лет.
Люминесцирующие бруцеллезные антитела
Для обнаружения бруцелл в мазках из различных материалов от больных и животных (кровь, костный мозг), биопробного материала, из первичных культур, подлежащих окончательной идентификации, и некоторых объектов внешней среды могут быть применены люминесцирующие бруцеллезные сыворотки. Сырьем для их приготовления служат гипериммунные противобруцеллезные сыворотки. Препарат обладает строгой специфичностью, сообщая яркую люминесценцию B. melitensis, B. abortus bovis, B. abortus suis и не сообщая ее туляремийным бактериям и другим гетерологичным микробам.
Срок годности препарата - 1 год.