Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания
Патогенетическое обоснование применения эпидермального фактора роста при термической травме
Лихачева А. Г., Телешева Л. Ф., Долгушин И. И., Осиков М. В.,
3.1. Влияние локального применения эпидермального фактора роста на количественный состав лейкоцитов, популяционный спектр и показатели апоптоза лимфоцитов периферической крови у больных с термической травмой
Опытной группе наряду с комплексным лечением местно проводили перевязки с препаратом «Эбермин», где в качестве активных веществ присутствуют эпидермальный фактор роста и сульфадиазин серебра. Контрольной группе взамен этого применяли влажновысыхающие повязки с препаратом «Сульфаргин», мазь для наружного применения (МНН: сульфадиазин серебра, АО Таллиннский фармацевтический завод, Эстонская Республика). Относительное содержание сульфадиазина серебра в препаратах «Эбермин» и «Сульфаргин» одинаковое – 1 %. Перевязки проводились с 1 суток ТТ под марлевые повязки. При использовании марлевых салфеток и атравматичных сетчатых покрытий перевязки проводились 1 раз в 2–3 дня, при бесповязочном методе лечения – ежедневно.
Следует учитывать, что сульфадиазин серебра обладает самостоятельным противомикробным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий (Escherichia coli, Proteus spp., Staphylococcus spp., Klebsiella spp.), а также грибов Candida spp. и дерматофитов, умеренной осмотической активностью. Совместное использование сульфадиазина серебра и ЭФР рассматривается как вариант потенцирования протекторных эффектов последнего [102].
Количественный состав лейкоцитов в периферической крови у больных с термической травмой в условиях локального применения ЭФР представлен в табл. 24 и 25. На 10 сутки наблюдения в периферической крови как в абсолютных, так и в относительных величинах снижается содержание нейтрофилов за счет палочкоядерных и сегментоядерных форм, повышается содержание лимфоцитов. Однако, количество нейтрофилов и лимфоцитов не достигает уровня здоровых людей, сохраняется нейтрофильный лейкоцитоз и лимфоцитопения, но их выраженность значимо уменьшается.
При исследовании популяционного спектра лимфоцитов на 10 сутки после ТТ установлено повышение содержания CD3+, CD4+, CD8+, CD22+ (табл. 26). Причем, количество цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8 +) и В-лимфоцитов (CD22+) достигало значений здоровых людей.
На 20 сутки после термической травмы локальное применение ЭФР приводило к значимому снижению общего содержания нейтрофилов в периферической крови. В целом, на данном этапе наблюдения количество лейкоцитов, лейкоцитарная формула, а также представительство популяций лимфоцитов не отличались от соответствующих показателей группы здоровых людей.
Одним из механизмов увеличения общего количества лимфоцитов и их субпопуляций в периферической крови у больных на 10 сутки после термической травмы является снижение интенсивности апоптоза. Результаты влияния локального применения эпидермального фактора роста на показатели апоптоза лимфоцитов у больных с термической травмой представлены в табл. 27. Так, на 10 сутки наблюдения уменьшалось относительное содержание лимфоцитов, экспрессирующих маркер готовности к запрограммированной гибели (CD95+), снижалось абсолютное количество лимфоцитов, несущих морфологические признаки апоптоза. На 20 сутки после термической травмы снижалось относительное и абсолютное количество лимфоцитов, имеющих как признаки готовности к апоптозу, так и структурные изменения ядра.
Таблица 24
Влияние локального применения эпидермального фактора роста на количественный состав лейкоцитов периферической крови у больных с термической травмой (М ± m)
|
Группы
Показатели |
Группа 1 Здоровые n = 30 |
Группа 3к
ТТ n = 30 |
Группа 3о ТТ + ЭФР 10 сутки n = 30 |
Группа 4к
ТТ n = 30 |
Группа 4о ТТ + ЭФР 20 сутки n = 30 |
|
Эозинофилы, % |
1,33 ± 0,18 |
0,50 ± 0,18 р 1-3к < 0,01 |
1,18 ± 0,26
|
0,78 ± 0,29 р 1-4к < 0,05 |
0,75 ± 0,17 р 1-4о < 0,05 |
|
Нейтрофилы п/ядерные, % |
2,50 ± 0,18 |
11,30 ± 0,51 р 1-3к < 0,001 |
8,18 ± 0,82 р 1-3о < 0,001 р 3к-3о < 0,01* |
6,44 ± 0,35 р 1-4к < 0,001 |
6,50 ± 0,68 р 1-4о < 0,01 |
|
Нейтрофилы с/ядерные, % |
59,08 ± 0,96 |
64,70 ± 0,73 р 1-3к < 0,01 |
56,00 ± 1,79 р 3к-3о < 0,01* |
60,11 ± 0,82 |
59,50 ± 0,91 р 1-4о < 0,01 |
|
Нейтрофилы, % |
61,58 ± 0,99 |
76,00 ± 0,80 р 1-3к < 0,001 |
64,18 ± 1,33 р 1-3о < 0,001 р3к-3о < 0,01 |
66,56 ± 0,72 р 1-4к < 0,01
|
66,00 ± 1,10 р 1-4о < 0,01 |
|
Лимфоциты, % |
32,08 ± 0,79 |
18,50 ± 0,61 р 1-3к < 0,001 |
28,91 ± 1,14 р1-3о < 0,001 р 3к-3о < 0,01 |
29,11 ± 0,84 р 1-4к < 0,01
|
29,50 ± 0,93 р 1-4о < 0,01 |
|
Моноциты, % |
5,00 ± 0,46 |
5,00 ± 0,51 |
5,73 ± 0,54 |
4,00 ± 0,28 |
3,75 ± 0,63 |
Примечание. р – показатель различия между группами по критерию Манна-Уитни (* – критерию Вальда-Вольфовитца).
Таблица 25
Влияние локального применения эпидермального фактора роста на количественный состав лейкоцитов периферической крови у больных с термической травмой (М ± m)
|
Группы Показатели |
Группа 1 Здоровые n = 30 |
Группа 3к ТТ 10 сутки n = 23 |
Группа 3о ТТ + ЭФР 10 сутки n = 13 |
Группа 4к ТТ 20 сутки n = 23 |
Группа 4о ТТ + ЭФР 20 сутки n = 13 |
|
Лейкоциты, •109/л |
5,33 ± 0,29 |
8,35 ± 0,47 р 1-3к < 0,001 |
9,05 ± 1,05 р 1-3о < 0,001 |
6,80 ± 0,53 р 1-4к < 0,05 |
6,60 ± 0,63 |
|
Эозинофилы, •109/л |
0,07 ± 0,01 |
0,04 ± 0,01 |
0,12 ± 0,03 |
0,05 ± 0,02 |
0,05 ± 0,01 |
|
Нейтрофилы п/ядерные, •109/л |
0,13 ± 0,01 |
0,95 ± 0,07 р 1-3к < 0,001 |
0,78 ± 0,13 р 1-3о < 0,001 р 3к-3о < 0,01* |
0,45 ± 0,04 р 1-4к < 0,001 |
0,43 ± 0,07 р 1-4о < 0,01 |
|
Нейтрофилы с/ядерные, •109/л |
3,13 ± 0,18 |
5,43 ± 0,34 р 1-3к < 0,001 |
5,12 ± 0,63 р 1-3о < 0,05 р 3к-3о < 0,01* |
4,12 ± 0,35 р 1-4к < 0,05 |
3,88 ± 0,33 р 4к-4о < 0,01* |
|
Нейтрофилы, •109/л |
3,26 ± 0,19 |
6,38 ± 0,39 р 1-3к < 0,001 |
5,90 ± 0,74 р 1-3о < 0,01 р 3к-3о < 0,01* |
4,56 ± 0,38 р 1-4к < 0,001 |
4,31 ± 0,38 р 1-4о < 0,01 |
|
Лимфоциты, •109/л |
1,69 ± 0,09 |
1,53 ± 0,09 р 1-3к < 0,01* |
2,50 ± 0,25 р 1-3о < 0,001 р 3к-3о < 0,001 |
1,96 ± 0,14 |
1,97 ± 0,21 |
|
Моноциты, •109/л |
0,27 ± 0,03 |
0,40 ± 0,04 р 1-3к < 0,01 |
0,52 ± 0,08 р 1-3о < 0,01 |
0,28 ± 0,04 |
0,27 ± 0,07 |
Примечание. р – показатель различия между группами по критерию Манна–Уитни (* – критерию Вальда-Вольфовитца).
Таблица 26
Влияние локального применения эпидермального фактора роста на популяционный спектр лимфоцитов у больных
с термической травмой
|
Группы
Показатели |
Группа 1 Здоровые n = 30 |
Группа 3к ТТ 10 сутки n = 30 |
Группа 3о ТТ + ЭФР 10 сутки n = 30 |
Группа 4к ТТ 20 сутки n = 30 |
Группа 4о ТТ + ЭФР 20 сутки n = 30 |
|
CD3+, % |
67,00 ± 0,25 |
60,10 ± 1,38 р 1-3к < 0,001 |
62,64 ± 0,93 р 1-3о < 0,01 |
62,13 ± 1,00 р 1-4к < 0,001 |
55,13 ± 1,76 р1-4о < 0,001 р 4к-4о < 0,001 |
|
CD3+, •109/л |
1,24 ± 0,09 |
0,93 ± 0,06 р 1-3к < 0,001 |
1,57 ± 0,16 р 1-3о < 0,01 * р 3к-3о < 0,001 |
1,19 ± 0,10 р 1-4к < 0,01 * |
1,05 ± 0,09 р 1-4о < 0,01* |
|
CD4+, % |
36,65 ± 0,65 |
34,90 ± 1,11 |
36,91 ± 0,48 |
36,13 ± 0,24 |
32,13 ± 1,11 р 1-4о < 0,01 р 4к-4о < 0,01 |
|
CD4+, •109/л |
0,65 ± 0,06 |
0,54 ± 0,04 р 1-3к < 0,01 |
0,93 ± 0,09 р1-3о < 0,01 * р 3к-3о < 0,001 |
0,69 ± 0,06 |
0,61 ± 0,05 |
|
CD8+, % |
25,30 ± 0,23 |
23,30 ± 0,38 р 1-3к < 0,01 |
24,45 ± 0,38 |
24,88 ± 0,58 |
22,88 ± 0,93 |
|
CD8+, •109/л |
0,47 ± 0,03 |
0,36 ± 0,02 р 1-3к < 0,01 |
0,62 ± 0,07 р 3к-3о < 0,001 |
0,49 ± 0,05 |
0,43 ± 0,03 |
|
CD4/CD8 |
1,48 ± 0,02 |
1,50 ± 0,04 |
1,51 ± 0,01 |
1,46 ± 0,03 |
1,42 ± 0,03 |
|
CD22+, % |
18,95 ± 0,76 |
20,34 ± 1,55 |
19,45 ± 0,36 |
18,50 ± 0,47 |
17,00 ± 0,26 |
|
CD22+, •109/л |
0,35 ± 0,03 |
0,31 ± 0,02 р 1-3к < 0,01 * |
0,48 ± 0,05 р 3к-3о < 0,01 |
0,35 ± 0,03 |
0,33 ± 0,03 |
|
CD16+, % |
16,45 ± 0,52 |
20,30 ± 1,04 р 1-3к < 0,01 |
18,45 ± 0,86 |
19,00 ± 1,43 |
14,75 ± 0,59 р 4к-4о < 0,001 |
|
CD16+, •109/л |
0,31 ± 0,03 |
0,30 ± 0,02 |
0,35 ± 0,05 |
0,37 ± 0,03 |
0,28 ± 0,02 |
|
CD25+, % |
14,15 ± 1,58 |
13,30 ± 0,52 |
11,09 ± 0,22 р1-3о < 0,01 р 3к-3о < 0,01 |
11,25 ± 0,57 |
12,25 ± 0,82 |
|
CD25+, •109/л |
0,28 ± 0,05 |
0,21 ± 0,02 |
0,28 ± 0,03 |
0,21 ± 0,02 |
0,22 ± 0,01 |
|
CD71+, % |
8,67 ± 0,59 |
17,10 ± 0,73 р 1-3к < 0,001 |
14,27 ± 0,74 р 1-3о < 0,001 р 3к-3о < 0,01 |
14,00 ± 0,62 р 1-4к < 0,001 |
11,25 ± 0,49 р 4к-4о < 0,01 |
|
CD71+, •109/л |
0,16 ± 0,02 |
0,27 ± 0,02 р 1-3к < 0,001 |
0,37 ± 0,05 р 1-3о < 0,01 р 3к-3о < 0,01 * |
0,27 ± 0,03 р 1-4к < 0,01 |
0,22 ± 0,02 р 1-4о < 0,01 |
|
HLA-DR+, % |
19,70 ± 0,83 |
19,40 ± 0,28 |
22,64 ± 0,67 р 1-3о < 0,01 р 3к-3о < 0,001 |
20,63 ± 0,31 |
19,63 ± 0,95 |
|
HLA-DR+, •109/л |
0,37 ± 0,04 |
0,29 ± 0,02 |
0,58 ± 0,07 р 1-3о < 0,01 р 3к-3о < 0,001 |
0,39 ± 0,03 |
0,36 ± 0,02 |
Примечание. р – показатель различия между группами по критерию Манна–Уитни (* – критерию Вальда-Вольфовитца).
С использованием корреляционного анализа установлено, что по мере снижения количества лимфоцитов, несущих признаки готовности к апоптозу и имеющих морфологические признаки апоптоза, в крови увеличивается общее содержание лимфоцитов, CD3+, CD4+, CD8+ лимфоцитов на 10 сутки после термической травмы (табл. 28). Интересно, что значимых связей между показателями апоптоза лимфоцитов и содержанием CD22+ клеток не обнаружено, несмотря на увеличение количества последних в кровотоке. Кроме того, отсутствовали достоверные связи между содержанием лимфоцитов с признаками апоптоза и количеством лимфоцитов и их популяций на 20 сутки после термической травмы. Максимальный протекторный эффект локального применения ЭФР в отношении количества лимфоцитов в кровотоке обнаруживается на 10 сутки наблюдения.
Известны некоторые молекулярные механизмы антиапоптического действия ЭФР. В частности, в экспериментальных условиях in vitro показана способность ЭФР ингибировать апоптоз в клеточной линии кератиноцитов НаСаТ, индуцируемых фактором ФНО-α, опосредованно, через активацию экспрессии рецептора пролиферации пероксисом – β (PPAR–β) [178, 179, 308].
Таблица 27
Влияние локального применения эпидермального фактора роста на показатели апоптоза лимфоцитов у больных
с термической травмой (М ± m)
|
Группы
Показатели |
Группа 1 Здоровые n = 30 |
Группа 3к ТТ 10 сутки n = 30 |
Группа 3о ТТ + ЭФР 10 сутки n = 30 |
Группа 4к ТТ 20 сутки n = 30 |
Группа 4о ТТ + ЭФР 20 сутки n = 30 |
|
CD95+, % |
10,45 ± 0,92 |
15,40 ± 0,79 р 1-3к < 0,001 |
9,64 ± 0,39 р3к-3о < 0,001 |
14,13 ± 0,51 Р 1-4к < 0,001 |
8,75 ± 0,60 р 4к-4о < 0,001 |
|
CD95+, •109/л |
0,20 ± 0,03 |
0,24 ± 0,02 р 1-3к < 0,01 |
0,24 ± 0,03 |
0,27 ± 0,02 Р 1-4к < 0,01 |
0,17 ± 0,02 р 4к-4о < 0,01 |
|
Апоптоз, % |
7,50 ± 0,66 |
11,20 ± 0,61 р 1-3к < 0,001 |
6,27 ± 0,42 |
8,63 ± 0,62 |
5,75 ± 0,48 р 4к-4о < 0,01 |
|
Апоптоз, •109/л |
0,13 ± 0,01 |
0,17 ± 0,01 р 1-3к < 0,01 |
0,15 ± 0,02 р 3к-3о < 0,01* |
0,17 ± 0,02 |
0,11 ± 0,02 р 4к-4о < 0,01 |
Примечание. р – показатель различия между контрольной (к) и опытной (о) группами (р3к-р3о; р4к-р4о) по критерию Манна–Уитни (* – критерию Вальда–Вольфовитца).
Итак, локальное применение ЭФР у больных с термической травмой приводит на 10 сутки наблюдения к частичному восстановлению количественного представительства в крови нейтрофилов, общего содержания лимфоцитов, а также CD3+, CD4+, CD8+, CD22+ лимфоцитов, увеличению количества лимфоцитов, несущих маркеры поздней активации (CD71+, HLA-DR+). Одним из механизмов восстановления количества лимфоцитов в периферической крови выступает ограничение их апоптоза.
Таблица 28
Корреляционная матрица показателей апоптоза лимфоцитов и показателями популяционного состава лимфоцитов в крови у больных на 10 сутки термической травмы в условиях локального применения эпидермального фактора роста
|
Показатели апоптоза Клетки |
CD95+, % |
CD95+, •109/л |
Апоптоз, % |
Апоптоз, •109/л |
|
Лимфоциты, •109/л |
R = –0,75 |
R = −0,37 |
R = –0,43 |
R = −0,09 |
|
CD3+, % |
R = 0,14 |
R = 0,05 |
R = −0,35 |
R = −0,21 |
|
CD3+, •109/л |
R = −0,02 |
R = −0,78 |
R = −0,01 |
R = −0,66 |
|
CD4+, % |
R = −0,36 |
R = −0,08 |
R = −0,48 |
R = −0,23 |
|
CD4+, •109/л |
R = 0 |
R = −0,75 |
R = 0,02 |
R = −0,69 |
|
CD8+, % |
R = −0,21 |
R = −0,06 |
R = −0,39 |
R = −0,08 |
|
CD8+, •109/л |
R = −0,06 |
R = −0,78 |
R = −0,09 |
R = −0,63 |
|
CD22+, % |
R = −0,02 |
R = −0,10 |
R = −0,31 |
R = −0,29 |
|
CD22+, •109/л |
R = −0,02 |
R = −0,17 |
R = −0,03 |
R = −0,25 |
|
CD16+, % |
R = 0,02 |
R = −0,16 |
R = 0,11 |
R = −0,07 |
|
CD16+, •109/л |
R = −0,11 |
R = −0,09 |
R = −0,29 |
R = −0,17 |