Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания
9.2. Материально-техническое обеспечение методики определения карбогидрат-дефицитного трансферрина
Настоящая методика предназначена для работы медицинских организаций, имеющих лицензию на амбулаторную психиатрию-наркологию и клиническую лабораторную диагностику.
Исследования, проведенные на базе ГУЗ МНПЦ, показали, что наиболее эффективным методом определения карбогидрат-дефицитного трансферрина, удовлетворяющим обязательным критериям к выбору метода оценки CDT, следует считать метод капиллярного электрофореза.
В качестве метода, наиболее подходящего для рутинных скрининговых исследований, был выбран метод капиллярного электрофореза в исполнении автоматических капиллярных систем Minicap или Capillarys производства Sebia и наборов реагентов к ним.
Данный метод основан на разделении заряженных молекул в жидкой среде внутри сверхтонкого кварцевого капилляра под действием электрического тока. Белковые молекулы при этом разделяются согласно своему электрическому заряду. На разделение также оказывают влияние рН электролита и электроэндоосмотический поток. Метод не требует предварительной обработки образцов и позволяет осуществлять как качественную, так и количественную оценку фракций трансферрина. Расчетная формула CDT при этом полностью соответствует рекомендациям IFCC.
Разделение изоформ трансферрина методом капиллярного электрофореза основано на разнице их электрического заряда, величина которого прямо пропорциональна количеству остатков сиаловой кислоты. Аналитический этап на системах Capillarys/Minicap полностью автоматизирован и включает в себя разведение образца и его инъекцию в анодную часть капилляра. Под действием высокого напряжения образец, мигрируя по всей длине капилляра, разделяется на фракции, каждая из которых, достигая катодной части капилляра, последовательно регистрируется путем измерения поглощения пептидных связей, определяемого при 200 нм. Детекция изоформ трансферрина осуществляется в следующем порядке: асиало-, дисиало-, трисиало-, тетрасиало- и пентасиалотрансферрин. После завершения миграции капилляры немедленно промываются моющим раствором и подготавливаются к разделению следующего образца, заполняясь буфером для электрофореза.
После детекции результаты обрабатываются программным обеспечением прибора и отображаются на экране монитора в виде процентного содержания фракций (количественный анализ) и денситометрической кривой (качественный анализ) (рис. 46).
Рис. 46. Представление результатов качественной и количественной оценки карбогидрат-дефицитного трансферрина. Представление результатов качественной и количественной оценки CDT