Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания

БАКТЕРИЙНЫЕ И ВИРУСНЫЕ ПРЕПАРАТЫ

Перетрухина А. Т., Блинова Е. И.,

Глава 9. ПРЕПАРАТЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ПРОТИВ ТУЛЯРЕМИИ

Возбудитель туляремии относится к роду Francisella, виду F. tularensis, группы 4 (Грамотрицательные, аэробные / микроаэрофильные палочки и кокки) определителя бактерий Берджи.
Мелкие неподвижные палочковидные клетки. Облигатные аэробы. Спор не образуют. Грамотрицательны.
Ферментативная активность туляремийного микроба не выражена.
Возбудитель туляремии имеет Vi- и О-антигены.
F. tularensis является внутриклеточным паразитом. Его вирулентность связана со способностью развиваться в фагоцитах и подавлять их киллерную активность, образовывать капсулу, эндотоксин, нейраминидазу. Антигены клеточной стенки обладают свойствами аллергенов, что ведет к сенсибилизации инфицированного организма и усугубляет действие других факторов вирулентности.
Естественные хозяева возбудителя - грызуны, водные крысы, домовые мыши. Заражение людей происходит при прямом контакте с больными животными, их трупами, через объекты внешней среды и пищевые продукты, инфицированные выделениями больных грызунов. Возможен и трансмиссивный путь передачи через укусы кровососущих членистоногих. От больных людей заболевание не передается.
Возбудитель может проникать в организм через слизистые оболочки верхних дыхательных путей, глаз, желудочно-кишечного тракта и даже через неповрежденную кожу. Это определяет разнообразие клинических форм инфекции: легочная, глазо-бубонная, абдоминальная, бубонная, язвенно-бубонная, генерализованная.
Туляремия - особо опасная инфекция. Заболевание протекает тяжело, продолжается в среднем 4-6 недель и заканчивается, как правило, выздоровлением.
Постинфекционный иммунитет характеризуется высокой напряженностью и определяется гуморальными и клеточными факторами. В первые недели или месяцы он нестерильный, а затем переходит в стерильный иммунитет.
Для микробиологической диагностики используют методы серодиагностики, иммуноиндикации, постановку аллергической диагностической пробы с тулярином. В специализированных лабораториях проводят бактериологическое исследование (материал для исследования определяется клинической формой болезни). Культуру выделяют, заражая лабораторных животных.
Для лечения туляремии используют антибиотики.
Специфическая профилактика осуществляется живой туляремийной вакциной. Создана и химическая вакцина, приготовленная из протективного антигена.
Туляремийная живая сухая накожная вакцина
Вакцина представляет собой высушенную в условиях вакуума взвесь (в сахарозо-желатиновом растворе) культуры туляремийного вакцинного штамма, выращенной на искусственной питательной среде. Вакцинный штамм, полученный путем лабораторного ослабления (аттенуации) вирулентного штамма, обладает высокой иммуногенностью и безвреден для организма человека.
Вакцину выпускают в запаянных стеклянных ампулах по 20 и более доз. Сухой препарат имеет вид беловатой таблетки, свободно перемещающейся в ампуле. К каждой ампуле сухой вакцины прилагается ампула со стерильной дистиллированной водой в объеме, необходимом для разведения вакцины. Разведенная вакцина имеет вид гомогенной взвеси.
Вакцину применяют немедленно после разведения. Разведенной вакциной можно пользоваться не более 4 ч. Не использованную в указанный срок вакцину уничтожают кипячением или прибавлением к ней дезинфицирующего раствора.
Прививку туляремийной вакциной проводят накожным (скарификационным) или внутрикожным (струевым) методом. Для этого используют одну и ту же вакцину, но в разных разведениях. Категорически запрещается вводить вакцину подкожно.
Прививку накожным методом производят на наружной поверхности средней трети левого плеча. Предварительно кожу очищают спиртом или спиртом и эфиром. Когда спирт испарится, стерильной пипеткой наносят, не касаясь кожи, по одной капле разведенной вакцины в двух местах на расстоянии 3-4 см. Далее левой рукой обхватывают плечо с нижней его стороны и слегка натягивают сверху кожу, а правой - прививательным пером, которое перед каждой прививкой нужно кипятить или протирать спиртом и обжигать на пламени, производят на коже через каждую каплю вакцины по две параллельные насечки длиной до 1 см. насечки не должны быть чрезмерно глубокими или, наоборот, поверхностными. После скарификации вакцину втирают в насечки тупой стороной прививательного пера в течение 30 с. Затем дают вакцине высохнуть в течение 10-15 мин.
В 1 мл вакцины содержится около 2-3 млрд. живых клеток (10 прививочных доз), а в двух каплях (одна прививочная доза) - не менее 200 млн. Число микробных клеток, попадающих в кожу при скарификации и последующем втирании, в точности не установлено, но, по-видимому, у взрослых составляет не менее 20 млн.
Результаты вакцинации проверяют через 4-5 суток после прививки, а при отсутствии реакции в этот срок повторно проверяют через 12-15 суток. При наличии на коже по ходу насечек выраженной красноты и припухлости диаметром не менее 0,5 см результат прививки оценивают как положительный. Лицам, у которых прививочная реакция в указанные сроки не обнаружена, следует произвести повторную прививку в течение месяца после проверки.
Вакцинация внутрикожным струйным методом осуществляется при помощи безыгольного инъектора. Сухую вакцину в ампуле, как и для накожной прививки, разводят дистиллированной водой в объеме, который указан на прилагаемой к вакцине ампуле с растворителем. Ампулу с разведенной вакциной тщательно встряхивают до получения гомогенной взвеси. Далее 1 мл этой взвеси набирают в стерильный шприц с длинной иглой и переносят во флакон, содержащий 19 мл стерильного физиологического раствора. Флакон встряхивают до получения равномерной взвеси. После разведения в 1 мл готовой для применения вакцины содержится 100-150 млн. живых бактерий. Разведенной вакциной можно пользоваться в течение 4 ч, после чего неиспользованную вакцину уничтожают кипячением или прибавлением к ней дезинфицирующих средств.
Разведенную туляремийную вакцину вводят однократно внутрикожно в наружную поверхность средней трети левого плеча. Место инъекции предварительно обрабатывают спиртом.
Непосредственно после инъекции на месте введения вакцины образуется папула диаметром до 1 мм, которая исчезает через 25-30 мин. У части привитых на месте введения вакцины отмечается незначительная болезненность, иногда выступает небольшая капля крови. Если на месте прививки папула не образовалась, что указывает на осечку инъектора, необходимо тут же повторить прививку на другом участке кожи плеча. Прививочная реакция развивается быстрее и несколько интенсивнее, чем при скарификационном методе, и, как правило, достигает максимума через 2 суток. Она характеризуется умеренно выраженной гиперемией и инфильтратом, обычно имеющими диаметр 1-4 см, редко больше. Гиперемия и отечность к 5-м суткам уменьшается и к 9-м суткам у первично вакцинированных исчезают. Корочка на месте прививки обычно не образуется.
После прививки с положительным результатом развивается иммунитет, который через 15-20 дней достигает обычно уровня, обеспечивающего защиту при контакте с возбудителями инфекции. В случае правильно проведенной прививки полноценной вакциной кожная аллергическая реактивность обнаруживается через год после вакцинации у 98 % взрослых привитых.
У части привитых в сыворотке крови к концу 1-й недели после вакцинации появляются антитела к антигену туляремийного микроба, выявляемые в реакции агглютинации. К исходу 5-7-й недели титр антител достигает максимума, а затем начинает снижаться.
Ревакцинацию лиц, привитых против туляремии, проводят через 5 лет.
Туляремийную вакцину следует хранить в сухом, темном помещении при температуре не выше 6 °С (можно при температуре ниже 0 °С). Чем ниже температура хранения, тем лучше сохраняется активность препарата.
Срок годности вакцины - 1 год. По истечении срока годности вакцины можно произвести ее переконтроль. Если по количеству живых микроорганизмов вакцина отвечает требованиям, то срок годности может быть продлен на 6 мес.
Тулярин для аллергической пробы
Туляремийный диагностикум - тулярин - изготавливается из вакцинного штамма, обладающего всеми типичными свойствами.
Маточная взвесь туляремийных микробов разводится 3 %-ным глицериновым физиологическим раствором до концентрации в 10 млрд. микробных тел в 1 мл по туляремийному стандарту и инактивируется однократным прогреванием при 70 °С в течение 1 часа. После прохождения контроля на стерильность препарат разливают в ампулы по 1 мл, запаивают и повторно прогревают при 70 °С 1 час.
Готовый препарат представляет собой слегка желтоватую жидкость. Он должен быть гомогенным, содержать типичные для вакцинного штамма грамотрицательные туляремийные бактерии, быть стерильным, безвредным и биологически активным. Стерильность препарата проверяется обычным способом.
Постановка накожной пробы с тулярином у людей воспроизводится так же, как и вакцинация. Местная реакция наступает через 24 часа и достигает максимума через 48-72 часа. Учет ее производится через 48 часов.
Определяют размеры гиперемированного и отечного участка кожи вдоль и поперек насечек. Реакция считается положительной при величине реагирующего участка в 0,5 см и более. Исчезает она к 7-15 дню. На месте насечек к этому времени остается мало заметный след. Категорически запрещается этот препарат применять подкожно и внутрикожно.
Срок годности препарата - 3 года.
Помимо тулярина, предназначенного для накожного применения, изготавливается препарат, применяемый внутрикожно. Препарат отличается меньшим содержанием убитых микробов (500 млн. микробных тел в 1 мл). Он представляет собой взвесь убитых нагреванием туляремийных микробов в 3 % глицериновом физиологическом растворе.
Готовый тулярин поверяется на чистоту, стерильность, специфическую безвредность и биологическую активность обычными способами. Биологическая активность испытывается на морских свинках белой масти весом 500 г, а специфическая безвредность - на белых мышах, которым вводят по 0,5 мл препарата.
Тулярин для внутрикожного применения вводится в дозе 0,1 мл строго внутрикожно на внутренней поверхности предплечья. Учет реакции производят через 24-48 часов. В положительных случаях на месте введения препарата через 4-10 ч отмечается появление местной реакции; через сутки она выражена отчетливо и имеет вид гиперемированного болезненного отека или инфильтрата. Гиперемия без отека, исчезающая через сутки, рассматривается как отрицательная реакция.
Внутрикожная проба после перенесенного заболевания остается положительной в течение нескольких лет.
Тулярин, предназначенный для внутрикожной пробы, непригоден для накожного применения, так как он не вызывает диагностической реакции.
Туляремийный эритроцитарный диагностикум
Препарат представляет собой 10 % взвесь в 10 % растворе формалина эритроцитов барана, сенсибилизированных антигеном, полученным из туляремийных бактерий. Активность препарата испытывается при помощи РНГА с лошадиной, агглютинирующей, диагностической туляремийной сывороткой с титром в реакции агглютинации не ниже 1:1600. Если титр этой сыворотки в РНГА с сенсибилизированными эритроцитами ниже, чем 1:20000, они признаются негодными. Для постановки реакции применяется 2,5 % взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Препарат предназначен для обнаружения антител (в РНГА и РТНГА) и антигена туляремийных бактерий (в реакции нейтрализации).
Срок годности препарата - 9 месяцев.
Туляремийная диагностическая сыворотка
Для диагностики туляремийных микробов и обнаружения их антигенов применяется сыворотка лошадей, баранов, кроликов, иммунизированных туляремийным антигеном. Сыворотка выпускается с титром не ниже 1:20 в реакции преципитации. Допускается реакция с гетерологичными микробами в титрах не выше 1/10 титра реакции с гомологичными микробами.
Срок годности жидкой сыворотки - 2 года, сухой - 3 года.
Люминесцирующие туляремийные антитела
Для обнаружения туляремийных микробов и их антигенов в мазках из различных материалов от больных людей и животных (кровь, костный мозг), биопробного материала, из первичных культур, подлежащих окончательной идентификации, и некоторых объектов внешней среды, могут быть использованы люминесцирующие туляремийные антитела, сообщающие яркую люминесценцию возбудителям туляремии и их антигенам и не действующие таким образом на другие гетерологичные микроорганизмы.
Туляремийный диагностикум для реакции агглютинации
Для серологической диагностики туляремии и для обнаружения иммунологических сдвигов в организме человека и животных при изучении вакцинных штаммов и вакцины широко используется постановка реакции агглютинации с сыворотками больных или привитых людей и иммунизированных или инфицированных животных.
В качестве антигена для обнаружения антител служит туляремийный диагностикум.
Препарат представляет собой взвесь убитых формалином (0,5 %) туляремийных микробов вакцинного штамма.
Диагностикум содержит 25 млрд. микробных тел по туляремийному стандарту в 1 мл формалинизированного физиологического раствора; при постановке объемной реакции агглютинации его разводят в 5 раз физиологическим раствором.
Препарат разливают в ампулы по 1 мл и контролируют на стерильность путем посева на желточную среду и слабо щелочной агар, агглютинабельность со специфической противотуляремийной сывороткой и отсутствие агглютинации с нормальной сывороткой и физиологическим раствором.
В кровянокапельной реакции применяется цельный диагностикум. При наличии в сыворотке крови агглютининов в титре 1:100 и выше положительная реакция должна наступать немедленно после смешивания крови с диагностикумом и быть резко выраженной.


Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074