Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания

БАКТЕРИЙНЫЕ И ВИРУСНЫЕ ПРЕПАРАТЫ

Перетрухина А. Т., Блинова Е. И.,

Глава 1. ПРЕПАРАТЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ПРОТИВ НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ

Возбудитель натуральной оспы относится к вирусам семейства Poxviridae, подсемейства Chordopoxviridae, рода Orthopoxvirus.
Вирион поксвирусов имеет кирпичеобразную или овальную форму и крупные размеры 220-450×140-260×140-260 нм. Это самый крупный вирус животных.
Геном представлен двунитевой ДНК, кодирующей 150-300 белков, из которых около 100 входят в состав вириона.
Все антигены поксвирусов можно разделить на структурные, растворимые и гемагглютинин. К структурным белкам-антигенам относится NP-антиген, общий для всего семейства; этот антиген связан с белком нуклеокапсида. Среди растворимых антигенов есть термолабильный и термостабильный. Гемагглютинин является липопротеидным комплексом, содержащим три гликопротеида. Гемагглютинин вызывает агглютинацию эритроцитов в широком диапазоне температур (от 4 до 37 °С) и рН (от 4,6 до 10,0).
В вирионах оспы выявлено 12-13 ферментов. Среди них находится ДНК-зависимая РНК-полимераза и другие ферменты, связанные с транскрипцией ДНК, модификацией иРНК, киназы и протеазы.
Репликация вируса осуществляется только в цитоплазме. Зрелые вирионы через аппарат Гольджи доставляются к клеточной поверхности и выходят из клеток путем экзоцитоза. Включения в цитоплазме (в околоядерной области) зараженных клеток являются либо «фабриками» в стадии их функционирования, либо их остатками вместе с неиспользованными продуктами вирусиндуцированного синтеза. Эти включения называются «тельца Гварниери» (1892). Элементарные тельца, обнаруженные в отделяемом везикул Пашеном (1906) «тельца Пашена», имеющие большое диагностическое значение при оспе.
Вирус проникает в клетки слизистой оболочки верхних дыхательных путей и после размножения по лимфатической системе переносится в регионарные лимфатические узлы. В них происходит дальнейшее размножение вируса и наступает первичная вирусемия, которая приводит к инвазии ретикулоэндотелиальной системы. Начинается интенсивное размножение вируса, приводящее ко вторичной вирусемии. После этого вирус накапливается в эпидермисе и вызывает поражения кожи. С появлением сыпи больной становится заразен. Основным источником заражения является отделяемое носоглотки. Заболевание развивается после инкубационного периода продолжительностью 8-18 дней и начинается внезапно лихорадкой, головной болью, болями в мышцах, прострацией и появлением характерной сыпи. Сыпь проходит стадии макулы, папулы, везикулы, пустулы и завершается образованием рубца - все это длится 3 недели. С появлением сыпи температура снижается и вновь повышается, когда образуются пустулы. Тяжесть течения варьирует. Известны две формы оспы - натуральная (variola major) с летальностью
20-40 % и «алястрим», малая оспа (variola minor) с летальностью 1-2 %.
Перенесенная инфекция, как и вакцинация, приводит к развитию стойкого пожизненного иммунитета.
В 1953 г. на XI Всемирной ассамблее здравоохранения В.М. Жданов внес предложение о программе ВОЗ по глобальной ликвидации оспы. В мае 1980 г. ВОЗ объявила о ликвидации заболеваемости оспой в мире. После завершения программы ВОЗ рекомендовала повсеместно прекратить рутинную вакцинацию населения, а с 1991 г. -
армейских контингентов. Вакцинацию было рекомендовано проводить исследователям, работающим в лабораториях с вирусом натуральной оспы и оспы обезьян или другими патогенными для человека ортопоксвирусами, членам бригад, обследующих очаги оспы обезьян (каждые 3 года).
Оспа относится к числу карантинных инфекций. Основные мероприятия в случае развития угрозы распространения инфекции складываются из карантинных мероприятий и вакцинации. При этом следует учитывать, что практически все население земного шара в настоящее время не имеет иммунитета, а число прививочных реакций будет очень высоким. Обострение эпидемической ситуации по оспе, в т.ч. в результате биотерроризма, будет иметь катастрофические последствия.
Сухая оспенная вакцина
Оспенная вакцина приготавливается из оспенного вируса, ослабленного проведением через организм коровы. Накопление вируса производится в коже телят, предпочтительно светлой масти, в возрасте от полутора до двух лет. Животных, предназначенных для производства оспенной вакцины, заготавливают в местностях, свободных от ящура, бруцеллеза, сибирской язвы и других эпизоотий крупного рогатого скота. Доставленные в производственный институт животные подвергаются карантинизации и подробно обследуются ветеринарным врачом. Перед переводом в производственные помещения их тщательно моют теплой водой с мылом.
Накануне заражения шерсть выбривается, и операционное поле тщательно дезинфицируется. С помощью специального скарификатора наносят поверхностные надрезы, в которые втирают прививочный материал, представляющий собой вакцину, полученную ранее. К прививочному материалу предъявляют строгие требования. Он должен быть свежим, высоковирулентным и вызывать у животного нормальный вакцинальный процесс. В нем не должно быть гемолитических кокковых форм и других патогенных микробов, а количество сапрофитных должно отвечать норме, принятой для оспенной вакцины.
За привитым животным устанавливается круглосуточное наблюдение: измеряется температура, отмечается аппетит, функция кишечника.
Обычно вакцинальная сыпь достигает нормального развития к 72-120 часам после прививки. В это время животное обескровливают, тщательно моют теплой водой с мылом, отсепаровывают кожу и разрезанные куски ее замачивают в 1,5 % растворе карболовой кислоты. По истечении 18-22 часов кожа трижды споласкивается стерильной дистиллированной водой, после чего вакцинальная сыпь соскабливается острой ложкой.
Сырой соскоб, снятый с кожи телка, растирают в специальной шаровой мельнице до превращения его в тонко измельченную массу и смешивают с сахарозо-желатиновой средой в соотношении 1:3. Тщательно растертая смесь разливается в ампулы в количестве, достаточном для десяти или двадцати прививок, и подвергается сублимационному высушиванию.
В процессе приготовления и по окончании его вакцина подвергается сложной проверке. Бактериологический контроль имеет целью установить состав и количество аэробной и анаэробной микрофлоры. Вакцина, содержащая более трехсот бактерий сапрофитов в 0,01 мл, а также патогенные гемолитические стрептококки и стафилококки, протей и патогенные анаэробы, не допускается к выпуску. Безвредность вакцины проверяется подкожным введением ее морской свинке (1 мл) или двум мышкам (0,2 мл). В течение пяти дней у животных не должно наблюдаться патологических явлений.
Вакцина должна обладать определенной степенью вирулентности, которая устанавливается на морских свинках и кроликах.
Сухая оспенная вакцина представляет собой хорошо сформированную таблетку, легко отделяющуюся от стенок ампулы. Перед употреблением вакцину разводят стерильным раствором глицерина, приложенным к каждой ампуле вакцины. Препарат применяют накожно.
До отмены прививок в СССР существовала схема:
1-я доза - при рождении;
2-я и 3-я (ревакцинации) - через 8 и 16 лет соответственно.
Постпрививочные осложнения могут быть:
1) со стороны ЦНС - энцефалиты, энцефалопатии;
2) кожно-слизистые;
3) со стороны других органов и систем.
При первой группе летальность у детей 1-3 месячного возраста достигает 30-75 %, 5-14 лет - 10-12 %, значительно снижаясь в случае лечения специфическим иммуноглобулином. При второй группе развивается вакцинальная экзема («прогрессирующая вакцина»). При третьей форме возможны миокардит, перикардит, нефриты, неврозы, пневмонии, остеомиелиты и др., часто заканчивающиеся летально.
Сухая оспенная вакцина годна в течение 1 года с момента съемки соскоба.
Культуральный оспенный аллерген и контрольный препарат
для реакции in vitro
Данный препарат был разработан в Томском НИИВС Перетрухиной А.Т. (1976) для изучения иммуно-аллергической перестройки организма при оспенной вакцинации и для экспресс-диагностики поствакцинальных осложнений.
Культуральный оспенный аллерген получали путем инактивации вируса вакцины с сохранением его аллергенных свойств, используя ультрафиолетовое облучение. Для стабилизации физических свойств аллергена применяли метод лиофилизации. Полученный аллерген в тесте ППН (показатель повреждения нейтрофилов) позволяет выявлять специфические аллергические реакции у людей, привитых оспенной вакциной раньше, чем появляются специфические антитела.
Противооспенный донорский иммуноглобулин
Препарат представляет собой 10 % раствор (в физиологическом растворе) гамма-глобулиновой фракции крови доноров, специально ревакцинированных против оспы.
С целью получения препарата отбирают свежепривитых против оспы доноров с наиболее выраженной кожной реакцией на ревакцинацию. Начиная с 14-21 дня после ревакцинации, у доноров берут кровь для приготовления иммуноглобулина. Иммуноглобулин готовят из сыворотки или плазмы методом фракционирования этиловым спиртом при низких температурах. Препарат можно готовить со стабилизатором, в качестве которого используют глицин. Можно добавлять консервант (мертиолят).
В готовом виде препарат представляет собой бесцветную или слабо-желтого цвета прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость. При хранении в нем может появляться незначительный, легко разбивающийся осадок. Активность препарата измеряется титром содержащихся в нем вируснейтрализующих антител. Минимально допускаемый титр противооспенных антител в препарате должен быть не ниже 1:4000. Иммуноглобулин выпускают стерильным, безвредным и апирогенным. Содержание гамма-глобулиновой фракции должно составлять не менее 97 % количества общего белка. В растворе иммуноглобулина белок должен содержаться в концентрации 10 %. Противооспенный донорский иммуноглобулин выпускают расфасованным в ампулы по 3 мл.
Препарат применяли раньше при плановых прививках детям старше 3 лет, а также при лечении всех тяжелых поствакцинальных осложнений. По эпидемическим показаниям его могут использовать для экстренной профилактики оспы в случаях поздней вакцинации после контакта с больным или в случае биотерроризма.
Донорский оспенный иммуноглобулин должен сохраняться в сухом помещении при 2-10 °С. Срок годности 3 года с момента выпуска. По истечении его препарат может быть направлен для повторного контроля в институт-изготовитель. В случае, если препарат сохраняет минимально допустимую активность, срок его годности может быть продлен на 6 месяцев.
Иммуноглобулин крови человека,
титрованный на содержание противооспенных антител
Препарат представляет собой 10 % раствор (в физиологическом растворе) гамма-глобулиновой фракции крови людей. Его получают из плаценты, плацентарной и абортной крови человека. В качестве иммуноглобулина, титрованного на содержание противооспенных антител, отбирают серии нормального (противокоревого) иммуноглобулина с титром вируснейтрализующих антител не менее 1:2000.
Препарат применяли с целью профилактики осложнений, которые возможны при вакцинации против оспы. Его также можно использовать для профилактики кори.
Срок годности препарата 3 года при хранении в сухом темном помещении при 2-10 °С.
Гетерологичный противооспенный гамма-глобулин
Препарат представляет собой гамма-глобулиновую фракцию, выделенную спиртовым осаждением или методом электродекантации из сывороток лошадей или ослов, гипериммунизированных вирусом осповакцины и содержащих антитела к нему.
Противооспенный гамма-глобулин предназначен для профилактики заболевания и лечения больных оспой, а также взрослых людей с осложнениями после противооспенных прививок.
Препарат контролируется так же, как и все гамма-глобулины. Титр антител определяется реакцией нейтрализации вируса осповакцины на 12-дневных развивающихся куриных эмбрионах. Годным к выпуску считается препарат с титром антител не ниже 1:3125.
Лечебно-профилактическая доза противооспенного гамма-глобулина - 3-6 мл. Для десенсибилизации применяется этот же препарат, разведенный 1:100. Препарат вводится однократно; вторичное введение возможно не ранее чем через 10-15 дней.
Срок годности препарата - 8 лет.


Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074