Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания
Глава 8. ПРЕПАРАТЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ПРОТИВ ГЕРПЕСВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Среди вирусных заболеваний человека герпесвирусные инфекции занимают одно из ведущих мест. Из многочисленного семейства герпесвирусов (Herpesviridae) только 8 инфицируют человека: вирус простого герпеса (ВПГ) 1 и 2 типов (видовое название Human herpes virus 1 и 2 - HHV-1 и HHV-2); вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса (HHV-3); вирус Эпштейна-Барр (HHV-4); цитомегаловирус человека (HHV-5); HHV-6; HHV-7; HHV-8. Кроме того, известен вирус герпеса обезьян В, который при инфицировании людей вызывает энцефаломиелит, как правило, со смертельным исходом. В настоящее время в РФ зарегистрированы вакцины против HHV-1, HHV-2, HHV-3. Против цитомегалии (HHV-5) в различных странах ведутся разработки средств специфической профилактики (Двухкомпонентная ДНК вакцина против ЦМВ-инфекции).
Инфекции, вызванные ВПГ 1 и 2 типов
Вирионы имеют 120-150 нм в диаметре и характеризуются сложным строением. Внутренний компонент представлен сердцевиной, которая содержит ДНК и заключена в белковый капсид. Капсид окружен липопротеидной оболочкой с шипиками на поверхности.
Геном представлен линейной ДНК, состоит из двух ковалентно связанных фрагментов - длинного и короткого. Каждый фрагмент имеет специфический нуклеотидный состав.
Вирус содержит ряд антигенов, связанных как с внутренними белками, так и с гликопротеидами. Основными иммуногенами являются гликопротеиды gB, gC и gD. Эти белки индуцируют вируснейтрализующие антитела и клеточный иммунный ответ организма. Общими антигенами для ВПГ-1 и ВПГ-2 являются gB и gD, а gC - типоспецифичен.
Основные пути заражения - воздушно-капельный (через слюну) и половой. Возможно заражение через предметы обихода, загрязненные слюной носителей возбудителя инфекции. Первичная репродукция вируса при стоматитах происходит в эпителии слизистой оболочки рта и глотки. По лимфатическим путям вирус попадает в кровь, вызывая генерализованную инфекцию. Возможными осложнениями являются герпетические менингиты и энцефалиты. Генерализованная герпетическая инфекция новорожденных поражает все органы и вызывает в тканях точечные некрозы и воспалительные очаги. В клетках пораженных тканей образуются внутриядерные включения. Ранние включения (тельца Каудри) содержат ДНК и заполняют все ядро, оттесняя хроматин к краю ядра. Поздние включения не содержат ДНК.
Для вируса герпеса характерна его пожизненная персистенция в виде двунитчатых кольцевых форм ДНК в нейронах чувствительных ганглиев. Вирус герпеса патогенен для многих видов лабораторных животных - мышей, крыс, кроликов, морских свинок, хомяков, собак, обезьян.
Вирусы герпеса вызывают различные клинические формы болезни. У человека в раннем детстве - стоматит и фарингит с последующим развитием латентной инфекции, чередующейся с обострениями в виде высыпаний на губах и крыльях носа. У большинства людей первичная инфекция клинически не выражена, однако сопровождается образованием антител. ВПГ-1 и ВПГ-2 вызывают разные клинические формы. ВПГ-1 вызывает герпес губ, афтозный стоматит, герпетическую экзему, кератоконъюнктивит, менингоэнцефалит. ВПГ-2 вызывает половой герпес, герпес новорожденных. Наиболее массовыми и опасными формами являются половой герпес, герпетический кератит. Сравнительно редко встречаютсягенерализованный герпес новорожденных и герпетический энцефалит.
В крови переболевших обнаруживаются вируснейтрализующие и секреторные антитела, однако, они не препятствуют персистированию вируса в клетках нервной системы и развитию латентной инфекции.
Эпидемиология ВПГ-1 и ВПГ-2 также различна. Первичное инфицирование ВПГ-1 происходит в первые годы жизни, обычно в форме везикулярного стоматита. Дети обычно заражаются от родителей в период реактивации герпетической инфекции. Вирус передается через слюну и посуду, загрязненную слюной. В глаза вирус заносится грязными руками. Несмотря на образование антител, он не удаляется из организма, и носительство длится в течение всей жизни. Инфекция время от времени рецидивирует. Антитела к ВПГ-1 имеются у 70-90 % взрослых. ВПГ-2 передается половым путем или попадает в организм ребенка от больной матери во время рождения. Половой герпес распространяется как венерическая болезнь.
Материалом для исследования в острой стадии заболевания являются соскоб из везикул, слюна при поражениях слизистой полости рта, кровь при генерализованной инфекции, цереброспинальная жидкость при менингите и энцефалите, кусочки головного и спинного мозга в летальных случаях.
Мазки-отпечатки из соскоба герпетических везикул и осадков, полученных после центрифугирования цереброспинальной жидкости, красят по Романовскому-Гимзе и исследуют в световом микроскопе. Диагностическим признаком герпетической инфекции является наличие гигантских многоядерных клеток с внутриядерными включениями. Идентификацию вируса проводят с гипериммунными сыворотками животных методами РИА и ИФА. Высокочувствительным методом быстрой диагностики является также ДНК-гибридизация. Для выделения вируса из инфекционного материала используют куриные эмбрионы, культуры клеток и лабораторных животных. Двенадцатидневные куриные эмбрионы заражают инфекционным материалом на хорионаллантоисную оболочку. Через 48 часов инкубации при 37 °С на ХАО появляются типичные уплотненные бляшки, видимые невооруженным глазом. В окрашенных мазках-отпечатках из бляшек при световой микроскопии видны гигантские клетки с внутриядерными включениями.
Вирус герпеса размножается в культурах ткани различного происхождения, но наиболее пригодна для его выделения первичная культура почек кролика. В зараженных культурах вирус вызывает образование гигантских многоядерных клеток, округлых клеток и их конгломератов, в которых обнаруживаются внутриядерные
включения.
Для выделения вируса можно использовать мышей-сосунков, заражаемых через мозг или внутрибрюшинно, которые через 3-4 дня заболевают и вскоре погибают. Кроликов и морских свинок заражают на скарифицированную роговицу. Через 24-48 часов у них развивается кератоконъюнктивит, и в клетках роговицы обнаруживаются внутриядерные включения. Идентификацию вируса в куриных эмбрионах, клеточной культуре и клетках роговицы проводят в РИФ и РН.
Для определения прироста антител используют РСК. Антигены готовят из зараженных ХАО, мозга мышей-сосунков или культуры клеток. Также используют РН, РИФ и ИФА.
В остром периоде инфекции применяют химиотерапевтичекие препараты, индукторы интерферона. Для профилактики рецидивов в период ремиссии применяют многократное введение убитой герпетической вакцины. Ее применение показано при тяжелых рецидивирующих формах кожных, глазных, стоматологических и половых герпетических заболеваний. Для лечения полового герпеса и герпетических поражений глаз применяют комбинированное введение вакцины, химиотерапевтических препаратов и индукторов интерферона.
Вакцина герпетическая культуральная инактивированная
Представляет собой инактивированный формалином вирус простого герпеса I и II антигенных типов, выращенный на культуре ткани фибробластов куриных эмбрионов или Vero B. Содержит гентамицин (до 40мкг/мл) и стабилизатор - сахарозу и желатин.
Препарат предназначен для лечения больных герпетической инфекцией с тяжёлыми рецидивирующими формами поражения кожи и слизистых различной локализации: герпетических кератоконъюнктивитов, герпеса гениталий, высыпаний на коже и слизистых губ, крыльев носа и др.
Вакцину применяют только в стадии ремиссии не ранее, чем через 2 недели после полного исчезновения клинических проявлений герпетической инфекции, при офтальмогерпесе - не ранее, чем через 1 месяц. Препарат вводят внутрикожно в дозе 0,2 мл. Цикл лечения состоит из 5 инъекций, которые проводят с интервалом в 7-10 дней. Через 6 месяцев проводят повторный курс вакцинации.
Вакцина безвредна и не вызывает побочного действия.
Выпускают в ампулах по 0,3 и 0,5 мл.
Срок годности - 2,5 года при хранении в сухом тёмном месте при температуре 4-8 °С.
Ветряная оспа и опоясывающий герпес
Ветряная оспа - легкая инфекция, характеризующаяся папуловезикулярными высыпаниями на коже и слизистых оболочках и поражающая в основном детей. Опоясывающий герпес (herpes zoster) характеризуется воспалительной реакцией в задних корешках спинного мозга и спинномозговых ганглиях, наличием высыпаний на коже, иннервируемой пораженным чувствительным нервом. Это заболевание чаще поражает взрослых, чем детей. Обе инфекции вызывает один и тот же вирус, и они являются результатом различной реакции организма.
Вирус ветряной оспы передается воздушно-капельным путем, и первичное его размножение происходит в эпителии слизистых оболочек верхних дыхательных путей. По лимфатическим путям вирус попадает в кровь и из крови в кожу, вызывая поражение эпителия кожи и слизистых оболочек. На слизистых оболочках дыхательных путей появляется сыпь, подобная поражениям при натуральной оспе. В содержимом пузырьков находится вирус в высокой концентрации. Мацерация пузырька превращает его в ранку, и вирус легко передается при кашле, чиханье и разговоре.
Инкубационный период при ветряной оспе длится 14-21 день. Продромальный период характеризуется слабостью, подъемом температуры. Везикулярная сыпь и пузырьки появляются вначале на туловище, затем на лице и конечностях. Ветряная оспа новорожденных характеризуется высокой смертностью. Осложнением является энцефалит, пневмония. Ветряная оспа у женщин в первом триместре беременности может привести к врожденным уродствам у плода.
При опоясывающем герпесе вслед за недомоганиями и подъемом температуры возникают сильные головные боли в области кожи или слизистых, иннервируемых одной группой чувствительных нервов и ганглиев. Через несколько дней на этих участках кожи появляются высыпания (обычно на туловище, голове и шее).
Ветряная оспа встречается повсеместно и является чрезвычайно контагиозным заболеванием. Единственным источником инфекции является больной ветряной оспой или опоясывающим герпесом. Механизм передачи - аэрозольный, основной путь передачи - воздушно-капельный. Заболеваемость более высока в холодное время года.
Опоясывающий герпес встречается в виде спорадических случаев, не имеет сезонности, заражение происходит крайне редко в связи с отсутствием вируса в слизистых оболочках верхних дыхательных путей.
Материалом для лабораторных исследований является отделяемое носоглотки, содержимое кожных высыпаний, кровь. Для выявления специфического антигена используют РИФ, ИФА, РСК и ИЭМ. Серологическая диагностика проводится в РН в культуре клеток, ИФА и РСК. В качестве антигена в РСК используют экстракт зараженных клеточных культур после их трехкратного замораживания и оттаивания.
Предупредительные мероприятия при профилактике ветряной оспы включают своевременную изоляцию больных и разобщение лиц, контактировавших с ними. Больных ветряной оспой изолируют, как правило, на дому на 9 суток с момента начала заболевания. Дети в возрасте до 7 лет, бывшие в контакте с больными ветряной оспой, не болевшие ранее этой инфекцией и посещающие детские учреждения, разделяются на 21 сутки с момента контакта.
Профилактические мероприятия в очаге заболевания опоясывающим герпесом не проводятся.
Недавно японскими учеными была разработана живая аттенуированная вакцина против ветряной оспы. В США вакцинация против ветряной оспы введена в Национальный календарь прививок в 1996 года. В РФ зарегистрированы 2 вакцины: Варилрикс - вакцина для профилактики ветряной оспы, производство компании « GlaxoSmithKline» и Окавакс - вакцина для профилактики заболевания детей и взрослых ветряной оспой, производство компании «Biken Institute», Япония.
Живая аттенуированная вакцина против ветряной оспы
Вакцинный штамм ветряной оспы «Ока» был получен из везикулярной жидкости, взятой из везикулы мальчика 3 лет по имени Ока с типичным течением ветрянки. Аттенуация штамма была достигнута путем серии культивирования вируса на культуре эмбриональных клеток легкого человека при температуре 34 °С и повторных пассажей на эмбриональных фибробластах морской свинки. Затем вирус клонировали и выращивали на культуре диплоидных клеток человека для получения вакцинного штамма «Ока». Все вакцины против ветряной оспы, которые в настоящее время рекомендованы к применению ВОЗ, получены путем преобразования данного штамма, произведенного в Научно-исследовательском институте микробиологии университета Осака (краткое наименование Бикен). В настоящее время определен ген (ген вируса №62), изменения которого и приводят к аттенуации штамма «Ока».
Вакцина представляет собой лиофилизированный препарат живого аттенуированного вируса (штамм Ока) ветряной оспы, полученного размножением вируса в культуре диплоидных клеток человека MRC-5. Доза вакцины 0,5 мл (после растворения) содержит не менее 1033 бляшкообразующих единиц вируса ветряной оспы.
Детям с 9-месячного возраста и до 12-летнего возраста включительно назначают по 1 дозе вакцины (0,5 мл), детям в возрасте с 13 лет и старше - по 2 дозы с интервалом между ними не менее 6 нед. Для вакцинации пациентов группы риска может потребоваться введение дополнительных доз вакцины.
В связи с незначительным колебанием рН цвет готовой к введению вакцины может иметь оттенок от розового до красного. Перед инъекцией растворитель и растворенную вакцину необходимо внимательно визуально оценить на предмет наличия любых посторонних примесей и/или отклонения физических характеристик. В случае выявления отклонений растворитель или вакцину не применяют.
Вакцину растворяют, добавляя во флакон, содержащий сухой лиофилизированный порошок, прилагаемый растворитель. После добавления растворителя к порошку, смесь необходимо встряхивать до полного растворения порошка. При обработке места инъекции следует дождаться полного высыхания спирта или другого антисептика на поверхности кожи перед введением вакцины, поскольку они могут вызвать частичную инактивацию вируса. Вакцина должна быть введена сразу же после растворения.
Срок хранения лиофилизированной вакцины в холодильнике при температуре +2-+8 °С составляет 24 мес.