Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания
Глава 3. ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА В ДИАГНОСТИКЕ НАРКОМАНИИ
Для выявлении ПАВ в биологических жидкостях и тканях человека используются различные аналитические методы [1], сертифицированные Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ. Все методы можно разделить на две основные группы:
1. Предварительные методы используют для скрининга образцов при массовых обследованиях. Они являются наиболее простыми, недорогими и позволяют быстро сделать заключение о наличии наркотических веществ в исследуемом образце. При получении положительного результата образец направляют на проведение подтверждающего анализа. К указанной группе методов относятся различные виды высокотехнологичного иммунохимического анализа: твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) [2–6], поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА) [7], радиоиммуноанализ (РИА).
Наибольшее распространение для предварительного скрининга наркотических веществ получили иммунохроматографические (ИХ) экспресс-тесты. Метод позволяет в течение нескольких минут выполнить анализ в любых условиях, не требует оборудования и специалистов для его проведения [20]. Экспресс-тесты используют и в лабораторных условиях при прохождении медосмотров, устройстве на работу, обследовании абитуриентов и студентов вузов. В 2010–2011 годах проведен пилотный проект предварительного тестирования водителей сотрудниками ДПС с помощью экспресс-тестов по слюне при подозрении на наркотическое опьянение.
2. Вторую группу составляют подтверждающие методы анализа. Они применяются для идентификации и количественной оценки содержания ПАВ во всех видах биоматериала. К данной группе относятся хроматомасс-спектральные методы. Это газовая хроматография с масс-спектрометрической детекцией, жидкостная и высокоэффективная жидкостная хроматография. Перечисленные методы применяют для экспертизы в ХТЛ и судебно-медицинских лабораториях [9, 10]. Использование в качестве биообъектов волос и ногтей позволяет определить факты приёма наркотиков в отдаленные промежутки времени – спустя 3-6 месяца после последнего употребления ПАВ [11].
При решении вопросов, касающихся ответственности за административные и уголовные правонарушения, юридическую силу имеет только заключение ХТЛ, полученное с применением подтверждаю-
щего метода.
Приказ Минздравсоцразвития [12] описывает аналитические методы, которые разрешено применять в ХТЛ. Однако в нем не установлено четких нормативов по использованию различных биологических объектов и пороговых значений определения ПАВ. В настоящее время готовятся новые нормативные документы, в которых будут утверждены требования к выполнению аналитического этапа химико-токсикологических исследований, регламентировано применение предварительных и подтверждающих методов анализа, введены национальные уровни порогового значения для наиболее распространенных на территории РФ наркотических и психотропных веществ.
Выбор ИХМ и его схемы проведения зависит от конкретной прикладной задачи, на решение которой этот анализ будет направлен. В одних случаях, при масштабном скрининге, необходимо установить лишь факт наличия или отсутствия наркотического вещества в биообъекте, причем за довольно короткое время. В других случаях важно установить концентрацию вещества в образцах с высокой точностью, тогда как продолжительность определения несущественна. Поэтому для скрининга наркотических веществ и определения наркотической зависимости необходимы разнообразные методы иммуноанализа.
Получению готовой тест-системы для выявления анализируемого вещества предшествует длительный и тщательный процесс разработки метода определения. Причем, для разных веществ условия анализа разные и разработку методики нужно проводить отдельно. Принципиально важными моментами при разработке иммунохимических методов анализа являются их:
● специфичность (метод должен быть специфичен к определяемому антигену или группе антигенов и неспецифичен к другим антигенам, которые могут присутствовать совместно с определяемым);
● точность и надежность;
● достаточная быстрота, чтобы результаты анализа поступали своевременно;
● простота, позволяющая проводить анализ относительно неквалифицированному персоналу.
Одной из главной проблем ИХМ является также влияние компонентов биологических образцов на результаты анализа. К другим важным требованиям относятся использование в работе безвредных стабильных реагентов и невысокая стоимость анализа с точки зрения оборудования, реагентов и рабочего времени.
Разработку ИХМ проводят, принимая во внимание вышеизложенные критерии. Основные этапы разработки иммунохимических методов анализа следующие:
● выбор структуры и получение гаптенов, иммуногенов и меченых соединений;
● получение антител;
● тестирование антител, подбор меченого соединения, оптимизация условий иммуноанализа;
● изучение селективности, воспроизводимости и правильности метода;
● адаптация методики для анализа реальных образцов;
● медицинские испытания методики;
● определение статистических характеристик методики иммуноанализа.