Научная электронная библиотека
Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания
9.3. Проведение качественной и количественной оценки маркера CDT методом капиллярного электрофореза
Проведение качественного и количественного анализа CDT методом капиллярного электрофореза осуществляется в соответствии с Инструкциями по применению наборов реагентов для определения CDT и предусматривает выполнение следующих этапов:
– Настройка прибора для выполнения аналитических операций.
– Помещение пробирок с образцами в штатив(ы).
– Считывание штрих-кодов с пробирок с образцами и штативов для образцов (выполняется автоматически).
– Разведение образцов из первичных пробирок в сегменте для разведения (выполняется автоматически).
– Промывка капилляров и инжекция в них разведенных образцов (выполняется автоматически).
– Разделение фракций CDT и их прямая детекция в капиллярах (выполняется автоматически).
– Учет и интерпретация результатов.
– Завершение работы на приборе.
Учет и интерпретация результатов
После проведения анализа результаты качественного и относительного количественного определения изоформ трансферрина генерируются автоматически при помощи программного обеспечения прибора.
Учет результатов качественного анализа
Результаты качественной оценки представляют собой электрофоретические кривые, отображающие фракции трансферрина, присутствующие в анализируемом образце сыворотки и располагающиеся в следующем порядке: пентасиалотрансферрин, тетрасиалотрансферрин, трисиалотрансферрин, дисиалотрансферрин и асиалотрансферрин.
Учет результатов качественного анализа включает обязательную визуальную оценку полученной ЭФ кривой с целью выявления на профиле аномальных помех или генетических вариантов трансферрина, присутствие которых может влиять на результаты количественной оценки CDT.
Протокол исследования, содержащий графическую кривую с изображением профилей изоформ трансферрина, является обязательным приложением к заключению о результатах исследования. Заключение о результатах исследования без протокола качественной оценки считаются недействительными.
Учет результатов количественного анализа
Результаты относительной количественной оценки представляют собой автоматически скалькулированные относительные (%) концентрации изоформтрансферрина, полученные посредством прямой денситометрии фракций при 200 нм.
Полученные результаты количественной оценки по каждой изоформе трансферрина, выраженные в процентах, отображаются в виде таблицы справа от графической кривой. Цвет, присвоенный той или иной фракции трансферрина в таблице, всегда соответствует цвету этой же фракции, выраженной графически (рис. 46).
Для подсчета относительной концентрации изоформ CDT согласно формуле IFCC программное обеспечение прибора производит суммирование значений карбогидрат-дефицитных фракций (ди-, моно- и асиалотрансферрина) и приводит итоговый результат количественного анализа в виде процентного содержания изоформ CDT слева от графической кривой (рис. 45).Это же значение импортируется в Протокол исследования и служит показателем наличия или отсутствия хронического злоупотребления алкоголем.
В отсутствии интерферирующих факторов, значение CDT > 1,3 % в основном расценивают как показатель хронического алкогольного злоупотребления (положительный результат). Значение CDT < 1,3 % при отсутствии интерферирующих помех на ЭФ профиле расценивают как отрицательный результат. При получении значений в диапазоне 1,3 % ≤ CDT ≤ 1,6 % («серая зона») рекомендуется провести повторное исследование спустя 3–4 недели с использованием образца свежей сыворотки от этого же пациента.
Подробно методика определения карбогидрат-дефицитного трансферрина описана в Методических рекомендациях [2].
ЛИТЕРАТУРА
1. Современные лабораторные маркеры употребления алкоголя / О.И. Тарасова, Н.В. Мазурчик, П.П. Огурцов и др. // Клиническая фармакология и терапия. 2007. № 1 С. 1-5.
2. Методика диагностического тестирования на предмет хронического злоупотребления алкоголем. Методические рекомендации № 16. Утв. Департаментом здравоохранения Правительства Москвы. М.: 2011. 26 с.