С поликомпонентностью состава лишайников связаны трудности выбора дейтсвующих веществ, позволяющей репрезентативно стандартизировать сбор. Химический состав слоевищ лишайников р. Cladonia rangiferina грубого и механоактивационного помола исследовали с точки зрения перспективности их применения в качестве источника ФАВ для создания БАД различного спектра действия (адаптогенного, детоксикационного и др.), как чистого лишайникового биопрепарата, так и в комплексе с различными фармаконами. Этим обусловлен выбор анализируемых веществ.
Комплексообразующая функция, также как и экодетоксикационная, обусловлена наличием в исследуемых механоактивированных объектах β-олигосахаридов. Способностью лизировать патогенные и условно патогенные бактериальные клетки обладают лишайниковые кислоты, наиболее известным представителем которых является усниновая кислота.
Протонные спектры (рис. 13), полученные на ЯМР-спектрометре высокого разрешения Avance III 400 МГц (Βruker), свидетельствуют о том, что все образцы ягеля содержат ≈ 1 % усниновой кислоты. Исследуемые образцы готовили путем растворения соответствующих проб в дейтерированной воде. 1Н-спектры были сняты по стандартной методике в хлороформе, используя внешний стандарт DMSO.
На рис. 14 представлены спектры ягеля грубого помола и после механоактивационного воздействия в интервале частот 0–6 м.д. в аммонийном буфере (2,5 М, pH 9,5). Как видно все спектры образцов идентичны в алифатической области спектра. В целом спектр представляет собой смесь усниновой кислоты и поли- и олигосахаридных веществ.
Рис. 13. Протонные спектры в CHCl3:
А – усниновой кислоты; Β – ягеля грубого помола; C – ягеля после механоактивации
Рис. 14. Протонные спектры ягеля грубого помола (А) и ягеля после механоактивации (В) в аммонийном буфере в интервале 0–6 м.д.
В районе 3,0–3,4 м.д. проявляются сигналы протонов сахаридного остова лихенана, который состоит из последовательностей 1.3 и 1.4- связанных остатков глюкозы, помимо которых присутствуют сигналы аномерных протонов полисахаридов при 5,20 и 5,12 м.д.
В ходе механоактивации наблюдается изменения интенсивностей сигналов 3,29 и 3,33 м.д., точнее взаимоизменение их интенсивностей: при механоактивации уменьшается интенсивности сигнала 3,29 при увеличении сигнала 3,33 м.д. (рис. 15), что возможно свидетельствует об изменении химического окружения внутри циклов полисахарида. В отличие от щелочных экстрактов исследуемого вещества, в кислотной среде таких изменений не происходит и спектры ягеля различного воздействия идентичны.
Рис. 15. Протонные спектры ягеля грубого помола (А) и ягеля после механоактивации (В) в аммонийном буфере в интервале 3–3,5 м.д.
Таким образом, методом ЯМР – спектрометрии доказан передел лишайниковых полисахаридов до олигосахаридов в процессе механоактивации и определены основные действующие вещества.